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　　熒光定量PCR儀是一種利用熒光技術(shù)實(shí)現(xiàn)核酸分子擴(kuò)增的儀器，其工作原理可概括為：

　　1）檢測(cè)DNA樣本：根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，將DNA樣本加入實(shí)驗(yàn)支架，并置于定溫的PCR儀中進(jìn)行處理。

　　2）擴(kuò)增DNA：進(jìn)行PCR循環(huán)，即把該DNA樣本通過(guò)反轉(zhuǎn)錄酶（RT）從核酸狀態(tài)變成具有特定基因序列的DNA鏈。

　　3）檢測(cè)基因序列：利用特定的含有熒光探針的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，熒光探針是一種特定結(jié)合到特定基因序列上的分子標(biāo)記，在接觸能夠激發(fā)熒光的激發(fā)劑時(shí)，能夠發(fā)出熒光信號(hào)。

　　4）計(jì)算DNA濃度：通過(guò)檢測(cè)得到的熒光值可以計(jì)算出該DNA樣本的濃度。

　　熒光定量PCR儀常見(jiàn)的故障解決方法有哪些：

　　1、探頭檢測(cè)不準(zhǔn)確。當(dāng)定量PCR儀檢測(cè)到探頭信號(hào)不準(zhǔn)確時(shí)，可以嘗試使用不同的探頭，或者更換探頭（適當(dāng)減少擴(kuò)增溫度也是一種可能性），以確保精確分析結(jié)果。

　　2、儀器讀取不準(zhǔn)確。當(dāng)定量PCR儀讀取數(shù)據(jù)出現(xiàn)異常時(shí)，可以檢查儀器設(shè)置，例如查看相關(guān)的靈敏度調(diào)節(jié)參數(shù)并調(diào)整儀器設(shè)置，確保讀取正確的值。

　　3、無(wú)法正確識(shí)別反應(yīng)曲線。在定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，反應(yīng)曲線可能會(huì)變得不太明顯，此時(shí)可以嘗試使用不同的PCR反應(yīng)體系，比如改變反應(yīng)溫度或使用更高的模板濃度，也可以更換酶以獲得較好的反應(yīng)曲線。

　　4、圖形異常。若定量PCR圖形出現(xiàn)異常，則可能是工作液不夠穩(wěn)定或有其它問(wèn)題，需要重新校準(zhǔn)儀器。

　　5、反應(yīng)期產(chǎn)物剩余多。如果發(fā)現(xiàn)反應(yīng)期產(chǎn)物剩余過(guò)多，則需要檢查儀器設(shè)置，確保溫度設(shè)置正確。

　　6、實(shí)驗(yàn)反應(yīng)效率低。在實(shí)驗(yàn)中可能會(huì)發(fā)現(xiàn)反應(yīng)效率較低，這種情況下可能是由于反應(yīng)溫度過(guò)高或過(guò)低，使產(chǎn)物的活性降低，此時(shí)可以嘗試使用適當(dāng)?shù)臏囟?、模板濃度或酶?lèi)型來(lái)提高反應(yīng)效率，以便獲得較好的結(jié)果。